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聚合酶連式反應(yīng)
聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reation PCR) 又稱為無細胞克隆系統(tǒng)或特異性DNA 序列體外引物定向酶促擴增法，是基因擴增技術(shù)的一次重大革新。PCR 是利用單鏈募核苷酸引物對特異DNA 片段進行體外快速擴增的一種方法。該反應(yīng)是一個指數(shù)式反應(yīng)，可在短時間內(nèi)使極微量的目的DNA 片段特異地擴增上百萬倍。
RCR操作體系中含有:
(1)模板:其中包含有目的基因片段，PCR反應(yīng)的模板是待檢測核酸(DNA或RNA)分子，雙鏈DNA可直接用于反 應(yīng)，而RNA則需要用反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成為cDNA,然后用作聚合酶反應(yīng)的模板。
(2)DNA聚合酶:最初的聚合酶鏈反應(yīng)是用DNA聚合酶I的Klenow片段或T4DNA聚合酶催化的。但是由于每輪反應(yīng)都需要三個溫度點，最初的PCR需要在每輪反應(yīng)中加人DNA聚合酶。以后應(yīng)用耐熱TaqDNA聚合酶后，一次加酶反應(yīng)到底的問題才得以完滿的解決。
(3)一對引物:這是兩個人們根據(jù)已知DNA序列的、由人工合成的、與所要擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段，即左右端引|物。
(4)四種三磷酸脫氧核苷(即dNTP):這是合成DNA所需要的原料。
(5)適當?shù)木彌_液體系。
(1)模板:其中包含有目的基因片段，PCR反應(yīng)的模板是待檢測核酸(DNA或RNA)分子，雙鏈DNA可直接用于反 應(yīng)，而RNA則需要用反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成為cDNA,然后用作聚合酶反應(yīng)的模板。
(2)DNA聚合酶:最初的聚合酶鏈反應(yīng)是用DNA聚合酶I的Klenow片段或T4DNA聚合酶催化的。但是由于每輪反應(yīng)都需要三個溫度點，最初的PCR需要在每輪反應(yīng)中加人DNA聚合酶。以后應(yīng)用耐熱TaqDNA聚合酶后，一次加酶反應(yīng)到底的問題才得以完滿的解決。
(3)一對引物:這是兩個人們根據(jù)已知DNA序列的、由人工合成的、與所要擴增的DNA兩端鄰近序列互補的寡聚核苷酸片段，即左右端引|物。
(4)四種三磷酸脫氧核苷(即dNTP):這是合成DNA所需要的原料。
(5)適當?shù)木彌_液體系。
