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貴州吉創(chuàng)生物技術(shù)有限公司免疫組化實驗報告

1 細胞培養(yǎng)：

1)      傳心肌細胞至24孔板：將細胞舊培養(yǎng)基抽出，加入2mlPBS洗2次，加入400μl  0.25% 膠原酶，37℃消化2min。

2)      加入完全培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻，加入足量培養(yǎng)基，以500μl /孔向24孔板中加入細胞懸液（共傳6個孔），37℃繼續(xù)培養(yǎng) 。

2  實驗操作：

1觀察：24孔板中細胞生長正常，培養(yǎng)基透明澄清，未見明顯微生物活動，覆蓋約50%

2 操作：細胞鑒定---TNNI3（Assay biotech  B0588 ）免疫組化檢測

1） 將24孔板舊培養(yǎng)基抽出，用PBS洗3遍，每次300μl。

2） 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min。

3） 棄掉多聚甲醛，PBS洗3遍，每次300μl，浸泡3min。

4） 使用康為世紀免疫組化染色試劑盒，貨號CW2035S。（說明書另附）

5） 試劑一，常溫孵育10min。

6）去掉試劑一加入PBS 洗三遍，加試劑二, 室溫孵育10min 甩干。

7）加入1:100的TNNI3抗體（PBS稀釋）4℃孵育過夜。

8） 抽掉抗體， PBS洗3遍，每次3min，

9） 加入試劑3 室溫孵育10min。

10） PBS洗3遍，每次3min。

11） 加入試劑四,室溫孵育10min。

12） PBS洗3遍，每次3min。

13）配置DAB染色劑，取1ml試劑B至1.5ml離心管中，滴加試劑A   2滴，漩渦打勻。

14） 在每孔加入顯色劑300μl，顯微鏡下觀察（顯紅色）。

15）結(jié)果如圖。

1 培養(yǎng)：

1)      傳心肌細胞至24孔板：將細胞舊培養(yǎng)基抽出，加入2mlPBS洗2次，加入400μl  0.25% 膠原酶，37℃消化2min。

2)      加入完全培養(yǎng)基終止消化，吹打混勻，加入足量培養(yǎng)基，以500ul/孔向24孔板中加入細胞懸液（共傳6個孔），37℃繼續(xù)培養(yǎng) 。

2 實驗操作：

1觀察：24孔板中細胞生長正常，培養(yǎng)基透明澄清，未見明顯微生物活動，覆蓋約50%

2 操作：細胞鑒定---α-Actin（Proteintech  23660-1-AP）免疫組化檢測

1） 將24孔板舊培養(yǎng)基抽出，用PBS洗3遍，每次300ul。

2） 每孔加入300μl  4%多聚甲醛固定20min。

3） 棄掉多聚甲醛，PBS洗3遍，每次300μl，浸泡3min。

4） 使用康為世紀免疫組化染色試劑盒，貨號CW2035S。（說明書另附）

5） 試劑一,常溫孵育10min。

6）去掉試劑一加入PBS 洗三遍，加試劑二, 室溫孵育10min 甩干。

7）加入1:100的TNNI3抗體（PBS稀釋）4℃孵育過夜。

8） 抽掉抗體， PBS洗3遍，每次3min，

9） 加入試劑3 室溫孵育10min。

10） PBS洗3遍，每次3min。

11） 加入試劑四,室溫孵育10min。

12） PBS洗3遍，每次3min。

13）配置DAB染色劑，取1ml試劑B至1.5ml離心管中，滴加試劑A   2滴，漩渦打勻。

14） 在每孔加入顯色劑300ul，顯微鏡下觀察（顯紅色）。

15）結(jié)果如圖。

結(jié)果該細胞大部分被染成紅色，說明該細胞中含有α-Actin抗體。